Выделение ДНК. Цены, отзывы, рейтинги
Выделение ДНК – первоначальный этап при проведении полимерной цепной реакции.
Общая информация
Обработка клинического материала и получение дезоксирибонуклеиновой кислоты – важнейший этап молекулярно-биологического исследования.
Используемый элемент для исследования на определение возбудителей ИППП представляет сложную многокомпонентную систему, которая вмещает много ингибиторов, тормозящих амплификацию.
Зачастую сам механизм включает следующие стадии:
- быстрое растворение клеток;
- устранение клеточных органелл;
- ферментативная деструкция;
- экстрагирование белков;
- осаждение молекул в этиловом спирте.
Процесс проведения процедуры
Подготовка
Для выделения геномной ДНК берут 300 мМ ацетат натрия, 50 мМ ЭДТА , pH 7,5. Перед самим использованием вливают буферный раствор. Затем его кипятят в дистиллированной воде, около десяти минут, потом охлаждают пять минут во льду. Затем готовят саркозин. Для его приготовления требуется 10% данного раствора, а также стерильная вода, которую прогревают при 65оС один час.
Для выделения плазменной ДНК с вечера засевают культуру бактерий в 5мл LB с антибиотиком и оставляют на столе. С утра ее доращивают при 37оС и интенсивно взбалтывают.
Для выделения ДНК из крови берут свежую кровь, антикоагулянт, фильтрованную бумагу (марлю) для последующего пропитывания и образования нужного компонента.
Для выделения ДНК для ПЦР проводится лизис микроорганизма и экстракция нуклеиновой кислоты.
Выделение ДНК
Для получения геномной кислоты вносят метилкарбинол или пропанол в подготовленный образец. В результате образовываются фрагменты, пригодные для выполнения блот-гибридизации и клонирования в бактериофаге. Затем клетки промывают в 20мл холодного фосфато-солевого раствора. Далее их ресуспендируют.
Чтобы выделить плазменную дезоксирибонуклеиновую кислоту, заранее прогретый материал осаждают в эппендорфе. Затем обрабатывают в азоте. Далее подливают гидроксид натрия и аккуратно перемешивают, инкубируют 5 минут. После взбалтывают и отстаивают. Затем обрабатывают фенол-хлороформом. После этого сушат для выпадения осадка при 65оС. Приготовленный компонент растворяют в деионизованной жидкости.
Чтобы выделить образец из крови, в пробирку присаживают 0,5 мл лизирующего вещества, а также 20 мкл жидкой крови, вносят 15 мкл протеиназы и смешивают. Выдерживают при температуре 65 оС в течение 1-3 часов. После этого добавляют равный объем фенола и центрифугируют три минуты.
В случае выделения макромолекулы для ПЦР происходит простое кипячение с дальнейшим замораживанием и оттаиванием в присутствии лизоцима. Для этого применяются специальные буферы, содержащие детергенты и протеиназу.
Реабилитационный период
После этой процедуры не предусмотрена реабилитация пациента.
Показания
Основные показания: гепатит, менингит, сепсис, плеврит, артрит, паротит, венерические болезни, простатит, туберкулез.
Противопоказания
Противопоказаний не выявлено.
Осложнения
Как правило, никаких последствий после проведения манипуляций не наблюдается.
Цены и клиники
Обследование выполняют в частных медицинских учреждениях врачи-генетики. Чтобы узнать более подробные сведения о графике работы специалиста, стоимости приема и месте расположения клиники, воспользуйтесь медицинским порталом .
Схожі новини:
